miércoles, 11 de abril de 2012

Práctica 6: recuento de plaquetas

PRACTICA: 6
RECUENTO DE PLAQUETAS

Objetivo:

Realizar correctamente el conteo de plaquetas e interpretar correctamente los cálculos de la suma total de plaquetas o también llamadas trombocitos.

Fundamento:

Las plaquetas constituyen pequeños segmentos celulares anucleados desarrollados con el fin de adherirse a los vasos sanguineos dañados, agregarse unas con otras y facilitar la generacion de trombina. Estas acciones contribuyen a la hemostacia durante la formacion de un tapón plaquetario que repara el daño endotelial.

Las plaquetas también derivan de una celula pluripotencial de la médula ósea y circulan en la sangre periferica en el numero relativamente consta de 150 a 400 x 10’3/µl, con una amplia variabilidad interindividual. La llamada masa total de plaquetas incluye a las plaquetas circulantes y a aquellas que forman parte del pool esplenico (aproximadamente un tercio del total) entre la circulación y el pool esplénico, las plaquetas se intercambian consatantemente.

Las plaquetas no son más que pequeños fragmentos celulares, por lo tanto carecen de núcleo. Su diametro varia promedio varia de de 1,5 a 3 mcm, cerca de un tercio a un cuarto del tamaño del eritrocito.

Las plaquetas o trombocitos constituyen el elemento forme más pequeño de la sangre; su evaluación en el hemograma manual usualmente sólo se realiza en los extendidos coloreados. En el electrónico, su estudio aporta, además del valor numérico, otros parámetros de importancia diagnóstica, tales como promedio del volumen plaquetario e histograma plaquetario. A esta valoración la llamamos plaquetograma.
Existen dos métodos para el conteo de plaquetas: manual y electrónico.
 

Algunos tendrán recuentos de plaquetas estadísticamente anormales sin tener ninguna anormalidad demostrable. Sin embargo, si el recuento es muy alto o muy bajo la probabilidad de que una anormalidad este presente es más alta.

Tanto la trombocitopenia como la trombocitosis pueden manifestarse como problemas de coagulación. En general, los recuentos bajos de plaquetas incrementan el riesgo de sangrado; sin embargo existen excepciones. Por ejemplo la trombocitopenia inmune inducida por heparina. En la trombocitosis se puede producir trombosis, sin embargo esto sucede principalmente cuando el recuento elevado es debido a desordenes mieloproliferativos.

Las plaquetas son destruidas por fagocitosis en el bazo y por las células de Kupffer en el hígado. Una reserva de plaquetas es almacenada en el bazo y son liberadas cuando se necesitan por medio de contracción esplénica mediada por el sistema nervioso simpático.

Material y Equipo:

·         Pipeta de Thoma para glóbulos rojos.

·         Cámara de Neubauer con cubrehematímetro (Hemocitómetro).

·         Agitador para Pipeta de Thoma.

·         Cajas de Petri.

·         Microscopio.

·         Papel filtro

·         Material para venopunción.

Reactivos:

·         Sangre venosa con EDTA.

Técnica:

1.- Obtener 10 ml de sangre venosa, extraída por el procedimiento habitual, utilizando como anticoagulante EDTA.


2.- Se agita la sangre colocada en un tubo de ensaye y se procede a la cuenta de plaquetas de la siguiente manera:


3.- Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de una pipeta de Thoma para glóbulos rojos, aforando con la solución diluyente de plaquetas hasta la marca de 101 (Dilución 1: 100).


4.-  Colocar la pipeta en el agitador y mezclar durante 1 minuto.


5.- Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el cubrehematímetro sobre las mesetas.


6.- Descartar las primeras  4 gotas de la ´pipeta de Thoma. Con la quinta gota cargar la Cámara, depositándola entre la meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos.


7.-  Colocar la Cámara ya montada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro y absorbente humedecido en agua para evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15 minutos.


8.- Observar al microscopio contando en la cuadrícula central (para glóbulos rojos) las plaquetas que aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes.


9.- Realiza los cálculos siguientes para obtener la cantidad de plaquetas por mm3.



10.- El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y está dividido en 16 cuadritos más pequeños, de tal manera que el número total de éstos últimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas.


Resultados:


Total: 428

Cálculos: 428 X 100 X 10 = 428 000 plaquetas/ mm´3.

Rengo: normal


Cálculos:

No. de plaquetas / mm3  =  No. de Plaquetas contadas  X  Dilución  X  10

Dilución: 1:100  =  100

Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el volumen de la Cámara es de 0.1 mm3.

Ejemplo:

No. de plaquetas  =  375 X 100 X 10  =  375 000 plaquetas / mm3.



Valores normales:

Hombres 150 000 – 450 000

Mujeres  150 000 – 450 000



Observaciones:

Para hacer el recuento de plaquetas se utilizaron los dos diluyentes que fue el de hayem y el de turk de hecho fue más fácil identificarlas con el de turk ya que estas se coloraron un poco y en el de hayem estas se tenía que buscar bien ya que no se podían encontrar fácilmente, este recuento es muy importante ya que el resultado de este depende a que factor es el causante de una enfermedad ya que a continuación hablaremos más detalladamente del valor de estos. (si esta elevado o esta bajo).

Las plaquetas se cuentan más fácilmente utilizando microscopio de contraste de fase, pero si el microscopio de luz se adecúa correctamente y el conteo se hace con un estricto control de calidad el resultado será igualmente confiable. Especial atención debe tenerse con las soluciones diluyentes.
Estas no deben estar contaminadas, pues tanto las partículas como las bacterias pueden similares plaquetas. Los líquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes de su uso. La limpieza de la cámara de Neubauer y de las pipetas es importante en este procedimiento,
Si se observan agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse. El uso de EDTA como anticoagulante ayuda a disminuir la agregación plaquetaria. El rango de error para el recuento de plaquetas en el microscopio de luz es de 16 – 25%. No se debe informar el recuento de plaquetas sin confrontarlo con el extendido de sangre periférica, coloreado con Wright.

Conclusiones:

Los recuentos de plaquetas en general, no son corregidos con transfusión a menos que el paciente esté sangrando o el recuento haya caído por debajo 5 x 109/L. La transfusión esta contraindicada en la púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), puesto que estimula la coagulopatía. En los pacientes sometidos a cirugía, niveles inferiores a 50 x 109/L están asociados a sangrado quirúrgico anormal, y procedimientos anestésicos regionales como la anestesia epidural son evitados para niveles inferiores a 80-100 x 109/L. El recuento normal de plaquetas no es garantía de función adecuada. En algunos estados, las plaquetas, siendo normales en número, son disfuncionales.

El hemograma también realiza un recuento de las plaquetas. Las plaquetas son pequeñas células que se agrupan entre sí en las zonas de los vasos sanguíneos que han sufrido un daño. Son la base de la coagulación de la sangre, al ayudar a detener las hemorragias ya que son las primeras en acudir ante una lesión, en donde se agregan, adhieren y forman el tapón primario.

Trombopenia (disminución de plaquetas)
  • Enfermedades autoinmunitarias (el organismo produce anticuerpos contra sus propias plaquetas)
  • Aplasia medular
  • Radioterapia y quimioterapia por cáncer
  • Leucemia aguda
  • Coagulación intravascular diseminada
  • Anemia hemolítica microangiopática
  • Hiperesplenismo
  • Púrpura trombocitopénica idiopática
  • Prótesis de válvula coronaria
  • Transfusión de sangre
  • Choque anafiláctico
  • Algunas infecciones víricas
  • Algunos fármacos

Desordenes que provocan disfunción o recuento reducido:

Trombocitosis (aumento de plaquetas)
  • Anemia por déficit de hierro
  • Traumatismos
  • Tumores
  • Trombocitosis esencial
  • Policitemia vera
  • Leucemia mieloide crónica
  • Tras esplenectomía
  • Enfermedad de Kawasaki

Referencias:



·         Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas

Escrito por Bernadette F. Rodak

Pag.696-703

·         Hematología: Medicina de laboratorio


Escrito por J Miale

Pag.1035-1036




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