martes, 10 de abril de 2012

Práctica 5: recuento de leucocitos


PRACTICA: 5

RECUENTO DE LEUCOCITOS

Objetivo:

Realizar el recuento de leucocitos mediante la cámara de Neubauer para determinar el numero de leucocitos por mm^3, haciendo el conteo por los cuadrantes mas grandes de la cámara conociendo teóricamente cuales son. 



Fundamento:

Los leucocitos, al igual que las demás células sanguíneas, se forman en la médula. La función de cada tipo de glóbulo blanco (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos) es diferente. Las alteraciones que pueden presentar los leucocitos son del tipo oncohematológicas y no neoplásicas; estas últimas se pueden clasificar en cuantitativas y cualitativas. La leucopoyesis es un proceso que se lleva a cabo con gran actividad, ya que si el número de granulocitos circulantes de ninguna manera es comparable al de los eritrocitos, en cambio se estima que la sobrevida de los neutrófilos no excede de 5 días, de las cuales solo pasan 10 hrs. en la sangre circulante.

La sangre se diluye 1:2 con una solución hipotónica de ácido acético que destruye a los eritrocitos.  El azul de metileno permite reconocer fácilmente el líquido y observar mejor los glóbulos blancos, a los que tiñe ligeramente. Los normoblastos no se destruyen, por lo que se deben tomar en cuenta para corregir los resultados

El recuento leucocitario representa el número de leucocitos en un litro de sangre completa. La fórmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de los porcentajes puede incluso calcularse el número real de cada clase de leucocitos por mm3 de sangre (valor absoluto), conociéndose el total de leucocitos.

La cuantificación o recuento de leucocitos es importante para el diagnóstico de algunas enfermedades, como por ejemplo: Las leucemias.

El diluyente que más se utiliza en el laboratorio de hematología es el de Turk, el cual contiene ácido acético en una concentración hipertónica, lo cual provoca la lisis de los eritrocitos, pero, no de los leucocitos, el diluyente contiene además unas gotas de violeta de genciana o azul de metileno, el cual permite reconocer fácilmente a los leucocitos, ya que tiñen ligeramente su núcleo, permitiendo observarlos más fácilmente.



 La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por mm3 (milímetro cúbico).


Material y Equipo:

·         Microscopio

·         Boquillas

·         Pipeta de toma para glóbulos blancos

·         Papel filtro

·         Cámara de Neubauer

·         Material para venopuncion.



Reactivos:

·         Liquido de turk

Ácido acético glacial 3.0 ml

Agua destilada c.b.p. 100 ml

Adicionar 1 o 2 gotas de azul de metileno



Técnica:

1.-Obtener sangre por punción venosa con anticoagulante EDTA (tubo lila).


2.-Una vez obtenida la sangre con anticoagulante, se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca de 0,5 y  limpiar la punta con papel absorbente.


 3.-Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).


4.-Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador automático por 2 ó 3 minutos.


 5.-Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.


 6.-Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequeña de esta solución en la cámara.


 7.-Dejar reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.


8.-Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.


9.-Para hacer el recuento se deben tomar solo en cuenta las células que toquen las líneas del cuadro., este solo se aplica para los cuadros superior e izquierda.




Resultados:

Para hacer el recuento de leucocitos hay que tomar en cuenta cual e su morfología vistos en la cámara de Neubauer en el recuento la morfología de estos pueden ser unos  como puntos negros definidos.



CONTEO DE LEUCOCITOS EN LAS PARTES LATERALES DE LA CAMARA DE NEUAUER



è SUPERIOR IZQUIERDO:


Vista 40X

Leucocitos contados: 18

è SUPERIOR DERECHO


Vista de 40X

Leucocitos contados: 53



è INFERIOR DERECHO


Vista de 40X

Leucocitos contados: 42

è INFERIOR IZQUIERDO


Leucocitos contados: 16

Total de leucocitos: 129





Cálculos del conteo:

Leucocitos contados en 4 campos



Nº de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área



Leucocitos contados en 4 campos Reemplazando = 1/10 x 1/20 x 4



Leucocitos contados en 4 campos = 4/200 = 1/50



Nº de leucocitos x mm³ = Nº leucocitos contados x 50

4/200



VALOR TOTAL DE LEUCOCITOS EN mm3:



129*50= 6450/mm3



Rango: NORMAL



Valores normales:



Adultos: de 5 000 a 10 000 por mm3

Niños al nacer: de 10 000 a 25 000 por mm3

Un año: de 8 000 a 15 000 por mm3



Observaciones:

Al hacer este recuento observe y diferencie claramente los diluyentes de glóbulos rojos como de glóbulos blancos al igual que sus pipetas  la diferencia de estos en pipetas es que después que se mezcla el diluyente de hayem con la sangre se tiene una dilución de 1:200 en la pipeta de GR. mientras que la dilución de sangre con el líquido de turk 1:20 como podemos ver y llegar a una conclusión que consiste que la pipeta para glóbulos blancos tiene un bulbo menor que el de glóbulos rojas ya que se comprueba como se dijo anterior mente en sus disoluciones. Y hablando de la diferencia de sus diluyentes se podría decir que el de hayem mata a los leucocitos y mantiene la consistencia de los eritrocitos mientras el líquido de turk  destruye los eritrocitos y gracias al violeta de genciana tiñe ligeramente a los leucocitos (glóbulos blancos).

En esta práctica nos basamos en cuantos glóbulos blancos circulantes tenemos en la sangre ya que de el resultado de este nos derivamos a diversas enfermedades como ya vimos anteriormente nos sirve para observar si tenemos una leucocitosis o una leococitopenia que ya sabemos que uno es aumento y otro es disminución.   



Conclusiones:



La modificación del porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos.

Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares. Esto se denomina como "desviación a la izquierda". Este término sugiere infecciones bacterianas agudas.

La "desviación a la derecha" se dice cuando el porcentaje de linfocitos y monocitos se encuantra aumentado con respecto al de los polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), se asocia en general a enfermedades víricas.

La eosinofília, que es el aumento del porcentaje o del número total de eosinófilos, sugiere un cuadro alérgico o una infección parasitaria.

El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetría y recuento leucocitario completo.




Referencias:

·         Métodos de laboratorio M.J. Lynch/ S.S.Raphael/ L.D.Mellor/ P.D. Spare/ M.J.H.Inwood. pp.712-713.

·         Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas

Escrito por Bernadette F. Rodak P.P 381 BLOQUE 27






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