MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

 

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

Objetivo:

Realizar método de concentración por flotación simple.

Introducción:

En 1921 Willis, basándose en métodos de flotación simple anteriores describió el método que lleva su nombre, el cual dada su sencillez, se puede utilizar en trabajos de campo, ya que para realizarlo únicamente se requiere microscopio y laminillas. Este método se basa en un principio de flotación simple, utilizando una solución de cloruro de sodio de una densidad entre 1.200 y 1.250, en la cual los quistes, huevos y larvas flotan perfectamente.

Las técnicas de flotación permiten la separación de quistes de protozoos y huevos de ciertos helmintos del exceso de residuos mediante el uso de soluciones con elevada gravedad específica. Los elementos parasitarios son recuperados de la capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Con estas técnicas los preparados son más limpios que los obtenidos por sedimentación. Sin embargo, algunos huevos (como los opérculados, o los densos como los estériles de Ascaris lumbricoides) no se concentran bien en las flotaciones; en estos casos se recomienda el uso de técnicas de sedimentación. De todas maneras, en las flotaciones se observa también el fondo del tubo para asegurar la recuperación de todos los posibles organismos. Con el fin de maximizar la eficacia en la detección de parásitos intestinales se recomienda el uso de ambos métodos diagnósticos de manera conjunta.

Frecuencia de recuperación de helmintos y protozoos mediante dos técnicas de flotación.

<!--[if !vml]--><!--[endif]-->

Fundamento:

Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio (NaCl).

Los huevos y los quistes de peso específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del líquido.

Material:
·         vaso de precipitados
·         embudo
·         gasa
·         tubo de ensaye
·         Portaobjetos
·         Cubreobjetos
·        abate lenguas

Reactivos:

·         Solución saturada de cloruro de sodio (NaCl)

·         Solución de yodo-lugol

Reactivos biológicos del ser humano:

·        Muestra de heces fecales

Método:

Tomar aproximadamente 1gr. De heces con un abate lenguas.

Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.

En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa, llenando completamente el tubo.

Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de tal manera que el liquido haga contacto con el cubreobjetos.

 

5)    Esperar de 5 a 10 minutos.

6)    Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos que esta en contacto con la mezcla de heces y cloruro de sodio saturado.

Colocar una gota de yodo-lugol sobre un portaobjeto, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.

8)   Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40X, buscando quistes o huevecillos.   

  

Resultados:

               HECES FECALES 40X:

Encontramos un quiste de Entamoeba histolytica y fibras musculares. La Entamoeba histolytica es un parasito común en el intestino grueso de los humanos. Muchos casos son asintomáticos excepto en humanos que viven bajo estrés. Esta se transmite a través de las excretas de personas infectadas, a través del agua o alimentos contaminados estos se presentan en quistes y después se pueden presentar en trofozoítos.

Conclusión:

Cuando se presentan quistes estos presentan 4 núcleos en los quistes maduros puede haber menos de 4 en los inmaduros, pero nunca más. El citoplasma de los quistes pueden tener barras cromatoideas, con extremos redondeados, lisos. Su tamaño de los quistes es de 10ע-20ע estos son esféricos.

Comentario:

Mi punto de vista de esta práctica es que esta es fácil y sencilla y un poco rápida pero comparando con la de Ritchie esta es más eficaz que la de willis ya que recupera más helmintos. El método de willis lo debemos hacer con mucho cuidado ya que tenemos que hacer los movimientos rápidos ya que cuando el cubreobjetos lo ponemos al portaobjetos este movimiento debe ser rápido para que no se nos caigan los quistes o los huevos y así demos resultados verdaderos.

Fuentes de información:

·         E:\Parasitología latinoamericana - Estudio comparativo de recuperación de formas parasitarias por tres diferentes métodos de enriquecimiento coproparasitológico.htm

·         E:\MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN WILLIS « Parasitología General.mht

·         Diagnóstico microbiológico – koneman/allen/Dowell/Janda/Sommers/Winn.

·         Métodos de laboratorio M.J.lynch.

METODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

 

METODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

INTRODUCCIÓN:

Es un método de concentración fecal muy parecido al de Faust, solo que esta vez se sedimentará en el fondo nuestra materia fecal a examinar, y es útil para encontrar huevecillos, quistes y trofozoitos muy pesados.

Las sustancias que se destacan mas en este método es el formol y el éter ya que estos se deben a que se utiliza la centrifugación para acelerar la flotación y obtener un sedimento esta técnica distorsiona menos los huevos y los quistes.

La sedimentación: el método que utilizamos es mediante este sedimentando este es un método un poco lento pero sirve para que los huevecillos y quistes no se distorsionen, esto se debe  que estos se depositan por gravedad al fondo del recipiente que se utilice para este método se utiliza y un tubo de ensaye cónico, la sedimentación consiste en disolver cierta materia fecal en agua destilada, después de varias decantaciones y varias agregaciones de sustancias se toma una muestra del sedimento que esta se encuentra al fondo del tubo de ensaye y esta se analiza.

FUNDAMENTO:

Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda del formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Soluciones: ·         Solución salina isotónica ·         Solución de formaldehido al 10% ·         Éter

MATERIAL:

·         Centrifuga

·         Tubos de ensaye cónicos 15ml.

·         Gasas cortadas en cuadros

·         Embudos pequeños de cristal

·         Vasos de precipitado 50 ml.

·         Aplicadores de madera

·         Abate lenguas

·         Pipetas Pasteur con bulbo

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         Microscopio

Reactivos biológicos del ser humano:

·         Heces (de un paciente que tenga diarrea o mucosidad )

MÉTODO:

1)    Se coloca un poco de materia fecal en el vaso de precipitado aproximadamente 1g. o empíricamente el tamaño de una nuez pequeña esta se coloca con ayuda del abate lengua, se añaden 10ml. De solución salina y esta se mezcla.

2 ) Se filtra la suspensión a  través de la gasa colocada en el embudo esta doblada en 4 partes, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.

3)    Se centrífuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm., se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más. 

4)    Al último sedimento se agregan 5ml de solución de formaldehido al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

5)    Se añaden después 0.5 ml. De éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente durante 30 segundos.

6)    Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm.

7)    Después de centrifugar se observan 4 capas:

·         Éter superficial

·         Restos fecales

·         Formaldehido

·         Sedimento en el fondo del tubo.

8)    Se decanta el sobrenadante, se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.

9)    Se le añade una gota de yodo lugol y este se cubre con el cubre objetos de manera que se puede observar que estos se homogenizan.

10)  Estos se observan en el microscopio con el objetivo seco débil (10X) y seco fuerte (40X).

RESULTADOS:

VISTA 10X (seco débil):

Nada mas enfocamos en seco débil ya que no servía el seco fuerte. Esto es la vista del sedimento que nos quedo después de agregarle el yodo lugol. Este es una disolución de yodo molecular y yoduro potásico este se utiliza como un reactivo para prueba en análisis médicos y de laboratorio. Regresando al tema en esta imagen podemos observar demasiados quistes el resultado de esto podría ser por inadecuadas condiciones sanitarias. Si no se da un tratamiento rápido y seguro estos quistes pueden ser protozoos o helmintos estos pueden crear demasiadas enfermedades del tubo digestivo o cavidades esto es dependiendo de que quistes estemos tratando porque pueden ser  quistes de los 5 mas malos estos pueden ser de: entamoeba Histolytica, giardia lambia, isospora belli, b. coli, t. vaginalis. Estas todas tienen tratamiento ya que se les diferencia de la forma de los quistes.

CONCLUCIÓN: El método de concentración por sedimentación con formalina-éter es el procedimiento más utilizado para concentrar quistes de protozoos, huevos y larvas de helmintos, y es más eficiente que los métodos de flotación. Mediante este método se puede dar un resultado eficaz y a su vez acertado ya que la mayor parte de algunos parásitos se quedo en la sedimentación, esta práctica se debe realizar correctamente para no dar un resultado falso ya que al hacerlo se necesita mucha paciencia.

COMENTARIO: este método en lo particular se me hizo un poco fácil y un poco lento ya que mediante el sedimento podemos gran parte de parásitos estos sin deformarlos y al ver el procedimiento parte 7 podemos darnos cuenta como se separan estas capas así macroscópicamente podemos observar si esta practica se hizo correctamente en el fondo se puede ver la sedimentación donde se encuentran los parásitos que estos viéndolos microscópicamente podemos decir si son patógenos. Al decantar se debe hacer con cuidado porque si no puede ocurrir que se vallan los parásitos por no saber decantar bien

FUENTES DE INFORMACIÓN:

• Glosarios de términos en parasitología y ciencias afines- Alejandro cruz reyes, blanca Camargo-Camargo página: 206,207.
• Biblioteca de Consulta Microsoft  Encarta  2005 y Enciclopedia LAROUSSE Integral, Editorial LAROUSSE, pp. 341−355, El hombre y la salud.

Método de concentración-Flotación de Faust

“MÉTODO DE CONCENTRACIÓN- FLOTACIÓN DE FAUST”

Fundamento:

 Este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad especifica es de 1.180 (33%) que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos Necator 1.055, Tricocéfalo 1.150, Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos,  con su menor peso especifico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es a que se usa como reactivo una solución acuosa de sulfato de Zn al 33%con una densidad al 1.180. el agua utilizada diluye lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquese en delgada película la superficie del liquido centrifugadocon los huevos livianos de algunos helmintos.

Material:                                                     Sustancias:

·     Portaobjetos                                      - Sol. Acuosa de sulfato de Zn.

·    Cubreobjetos                                    

·    Gasas

·     Tubos de ensayo

Técnica:

Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

2)    Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro sobre, un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.

3)  Centrifugar el filtrado de 2500 rpm por 1 min.

4)    Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5)   -Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.

6)    Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazado por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con sedimento.  Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

Tomar 3-4 gotas de la partículas que flotan en la superficie del líquido colocarlo en un portaobjeto y mezclarla con 1-2 gotas de yodo lugol, colocar el cubreobjetos.

8)    Examinar al microscopio los resultados.

Nota:

Método indicado para e diagnostico de huevos livianos de helmintos (necátor, tricocéfalos, áscaris, h.nana).

Resultados y observaciones:

1°muestra) G.D 09/sep/11 5:49 a.m.

Al observar esta al microscopio con la vista de seco débil podíamos observar que existe en la imagen señalada de color azul un tejido conectivo y algunas partículas de grasas señaladas con rojo no se encontraron huevecillos de helmintos o alguna otra anormalidad solo residuos alimenticios.

 

2°muestra) R.J.C.J. 09/sep/11 6:17 a.m.

Esta fue una vista con el objetivo 40X  aquí podemos observar tejido conectivo señalado con color verde.

No se encontró alguna partícula sospechosa.

Conclusión:

Mi conclusión es que este método es fácil y sencillo comprendí como se da este procedimiento, cuando centrifugamos con agua destilada pude observar que en el fondo del tubo existía sedimentación, después de decantar y agregar sulfato de Zn al 33% con una densidad de 1.180 observe que en la superficie del tubo se formo una capa delgada que después fue colocada en un portaobjetos al observar las muestras en el microscopio me di cuenta que no exitia ningún tipo de parasitos solo restos alimenticios, para mi creo que se debe a la densidad de esto ya que el sulfato de Zn hace que algunas partículas floten.