PRACTICA: 5
RECUENTO DE LEUCOCITOS
Objetivo:
Realizar el recuento
de leucocitos mediante la cámara de Neubauer para determinar el numero de
leucocitos por mm^3, haciendo el conteo por los
cuadrantes mas grandes de la cámara conociendo teóricamente cuales son.
Fundamento:
Los
leucocitos, al igual que las demás células sanguíneas, se forman en la médula.
La función de cada tipo de glóbulo blanco (neutrófilos, eosinófilos, basófilos,
linfocitos y monocitos) es diferente. Las alteraciones que pueden presentar
los leucocitos son del tipo oncohematológicas y no neoplásicas; estas últimas
se pueden clasificar en cuantitativas y cualitativas. La leucopoyesis es un proceso que se lleva a
cabo con gran actividad, ya que si el número de granulocitos circulantes de
ninguna manera es comparable al de los eritrocitos, en cambio se estima que la
sobrevida de los neutrófilos no excede de 5 días, de las cuales solo pasan 10 hrs.
en la sangre circulante.
La sangre se diluye 1:2 con una
solución hipotónica de ácido acético que destruye a los eritrocitos. El azul de metileno permite reconocer
fácilmente el líquido y observar mejor los glóbulos blancos, a los que tiñe
ligeramente. Los normoblastos no se destruyen, por lo que se deben tomar en
cuenta para corregir los resultados
El recuento leucocitario representa el
número de leucocitos en un litro de sangre completa. La fórmula leucocitaria
tiene por objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de
leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de los porcentajes puede
incluso calcularse el número real de cada clase de leucocitos por mm3 de sangre
(valor absoluto), conociéndose el total de leucocitos.
La cuantificación
o recuento de leucocitos es importante para el diagnóstico de algunas
enfermedades, como por ejemplo: Las leucemias.
El diluyente que más se utiliza en el
laboratorio de hematología es el de Turk, el cual contiene ácido acético en una
concentración hipertónica, lo cual provoca la lisis de los eritrocitos, pero,
no de los leucocitos, el diluyente contiene además unas gotas de violeta de
genciana o azul de metileno, el cual permite reconocer fácilmente a los
leucocitos, ya que tiñen ligeramente su núcleo, permitiendo observarlos más
fácilmente.
La
sangre anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los
leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son
hemolizados. El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa
por mm3 (milímetro cúbico).
Material y Equipo:
·
Microscopio
·
Boquillas
·
Pipeta de toma para glóbulos blancos
·
Papel filtro
·
Cámara de Neubauer
·
Material para venopuncion.
Reactivos:
·
Liquido de turk
Ácido acético glacial 3.0 ml
Agua destilada c.b.p. 100 ml
Adicionar
1 o 2 gotas de azul de metileno
Técnica:
1.-Obtener sangre por punción venosa con anticoagulante EDTA (tubo lila).
2.-Una vez obtenida la sangre con
anticoagulante, se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos
blancos hasta la marca de 0,5 y limpiar
la punta con papel absorbente.
3.-Introducir
la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta la marca de
11 (no debe haber burbujas).
4.-Tapar ambos extremos y proceder a mezclar
manualmente o en un rotador automático por 2 ó 3 minutos.
5.-Monte
la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.
6.-Agitar
la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota
pequeña de esta solución en la cámara.
7.-Dejar
reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
8.-Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4
cuadrados grandes angulares.
9.-Para hacer el recuento se deben tomar solo
en cuenta las células que toquen las líneas del cuadro., este solo se aplica
para los cuadros superior e izquierda.
Resultados:
Para hacer el recuento de leucocitos hay que tomar en cuenta cual e su
morfología vistos en la cámara de Neubauer en el recuento la morfología de
estos pueden ser unos como puntos negros
definidos.
CONTEO DE LEUCOCITOS EN LAS PARTES LATERALES DE LA CAMARA DE NEUAUER
è SUPERIOR IZQUIERDO:
Vista
40X
Leucocitos
contados: 18
è SUPERIOR DERECHO
Vista de 40X
Leucocitos contados: 53
è INFERIOR DERECHO
Vista de 40X
Leucocitos contados: 42
è INFERIOR IZQUIERDO
Leucocitos contados: 16
Total de leucocitos: 129
Cálculos del conteo:
Leucocitos contados en 4 campos
Nº de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área
Leucocitos contados en 4 campos Reemplazando = 1/10 x 1/20 x 4
Leucocitos contados en 4 campos = 4/200 = 1/50
Nº de leucocitos x mm³ = Nº leucocitos contados x 50
4/200
VALOR TOTAL DE LEUCOCITOS EN mm3:
129*50= 6450/mm3
Rango: NORMAL
Valores normales:
Adultos: de 5 000 a 10 000 por mm3
Niños al nacer: de 10 000 a 25 000 por mm3
Un año: de 8 000 a 15 000 por mm3
Observaciones:
Al hacer este recuento observe y diferencie claramente los diluyentes de
glóbulos rojos como de glóbulos blancos al igual que sus pipetas la diferencia de estos en pipetas es que después
que se mezcla el diluyente de hayem con la sangre se tiene una dilución de
1:200 en la pipeta de GR. mientras que la dilución de sangre con el líquido de
turk 1:20 como podemos ver y llegar a una conclusión que consiste que la pipeta
para glóbulos blancos tiene un bulbo menor que el de glóbulos rojas ya que se
comprueba como se dijo anterior mente en sus disoluciones. Y hablando de la
diferencia de sus diluyentes se podría decir que el de hayem mata a los
leucocitos y mantiene la consistencia de los eritrocitos mientras el líquido de
turk destruye los eritrocitos y gracias
al violeta de genciana tiñe ligeramente a los leucocitos (glóbulos blancos).
En esta práctica nos basamos en cuantos glóbulos blancos circulantes
tenemos en la sangre ya que de el resultado de este nos derivamos a diversas
enfermedades como ya vimos anteriormente nos sirve para observar si tenemos una
leucocitosis o una leococitopenia que ya sabemos que uno es aumento y otro es
disminución.
Conclusiones:
La modificación del porcentaje de leucocitos puede orientar al
diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos.
Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes
aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un
aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares. Esto se
denomina como "desviación a la izquierda". Este término sugiere
infecciones bacterianas agudas.
La "desviación a la derecha" se dice cuando el
porcentaje de linfocitos y monocitos se encuantra aumentado con respecto al de
los polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), se asocia en general
a enfermedades víricas.
La eosinofília, que es el aumento del porcentaje o del número
total de eosinófilos, sugiere un cuadro alérgico o una infección parasitaria.
El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio
de hematimetría y recuento leucocitario completo.
Referencias:
·
Métodos de laboratorio M.J. Lynch/ S.S.Raphael/
L.D.Mellor/ P.D. Spare/ M.J.H.Inwood. pp.712-713.
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Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas
Escrito por Bernadette F. Rodak P.P 381 BLOQUE 27
