técnica e stoll

 

Técnicas de cuenta de huevos en heces la Técnica de stoll

(Cuantitativa)

Objetivo:

Realizar correctamente esta técnica para así realizar el conteo y cálculo de huevecillos de helmintos. Y así realizar la técnica cuantitativa.

Introducción:

Esta técnica consiste en contar los huevecillos de helmintos por eso se denomina cuantitativa, esta consiste en aclarar y homogenizar.

NEMATODOS: Gusano cilíndrico, también nematodo, es el nombre común de cualquier miembro de un filo de gusanos no segmentados.

ASCARIS: Áscaris, género de gusanos parásitos del filo de los Nematodos. Sus huevos se desarrollan en el agua o en tierra húmeda, y a las pocas semanas de su maduración en el suelo, se vuelven infectantes.

TRICHURIS: los huevos necesitan tres semanas o más para madurar en una forma infectante, según la temperatura, humedad y naturaleza del suelo en el que depositan los huevos.

Para calcular estos huevecillos se hace el siguiente cálculo, este cuando se hace a 56 ml de NaOH:

1.    La disolución fecal original es de 1 en 15 (4ml/60ml). Como se contaron los huevos en volumen total de 0.15 ml, el número total de éstos en 1ml de heces se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100 (1/5 x 0.15 x 100=1).

2.    Suponiendo que el promedio de una persona rebasa los 100 g de heces por día, es posible calcular el número de huevos por día multiplicando el resultado por 100 (o la cuenta de la suspensión original por 10 000).

3.    Para determinar el número de parásitos hembras presentes, se divide el número diario de huevecillos que hay en las heces entre el número promedio de

Hembra de la especie NECATOR: 7000 huevos/dia

Hembra de la especie ASCARIS: 200000 huevos/día

Hembra de la especie TRICHURIS: 7500 huevo/día

4.    se encuentra la cantidad total de parásitos al multiplicar por dos resultados encontrados en el paso tres, ya que se supone que en cualquier infestación hay un parásito macho por cada parásito hembra.

Fundamento:

Especie	Hábitat del adulto	Forma infectante	Formas diagnosticas
Áscaris lumbricoides	Intestino delgado y grueso del hombre; pueden migrar a conductos biliares o pancreáticos.	Huevos fértiles	Huevos fértiles: 60 x 45, redondos u ovoides, con una cáscara gruesa cubierta por una capa albuminosa; células internas en varios estadios de clivaje. Tienen color marrón. Huevos descorticados: las enzimas digestivas pueden disolver la capa albuminosa, dejando al huevo con una superficie descorticada lisa. Huevos infértiles: 90 x 40, cascara delgada con perdida de cobertura albuminosa. Gusanos adultos: 25cm a 35cm de longitud. Los machos son más pequeños que las hembras y tienen cola curva.
Trichuris trichiura	Intestino grueso	huevos fértiles	Huevos: 54 x 22, elongados, en forma de barril con tapones hilianos en ambos polos. La cáscara es amarilla a marrón; los tapones son incoloros. Gusanos adultos: 33 mm a 45 mm, porción anterior atenuada, semejante a un látigo; porción posterior corta y gruesa, a modo de mango.
Necator americanus	Intestino delgado. El es el cólex del adulto está firmemente adherido a la mucosa mediante placas cortantes.	Larvas  filariformes que penetran la piel,	Huevos: 65 x 40 tienen morfología similar A. duodenale. Larvas rabditiformes: semejantes a  A. doudenale. Cabeza del adulto: parte de la boca provista con placas cortantes agudas.

Material:

·         Aplicadores

·         Abate lengua

·         Tubos de ensaye cónicos

·         Cuentas de vidrio

·         Portaobjetos

·         cubreobjetos

Reactivos:

·         hidróxido de sodio (NaOH)

Reactivos biológicos del ser humano:

·         heces fecales

Método:

1)    se llena el tubo de ensaye cónico a 5.6 ml de NaOH 0.1 N.

2)    con el aplicador se agrega las heces hasta elevar el nivel de líquido a 6ml.

3)    Se añaden 10 cuentas de vidrio, se tapa con firmeza y se agita hasta que las heces se desmoronen por completo.

4)    Cuando las heces estén disueltas por completo, se agita el tubo un minuto y de inmediato se toman 0.075 ml de suspensión y se colocan en un portaobjetos y se coloca el cubreobjetos.

5)    Se coloca en el microscopio y con el objetivo de 40X se buscan los huevos.

Resultados:

Nosotros no encontramos ningún huevecillo pero cuando en esta técnica se llega a encontrar huevecillos se hace un calculo que fue el y ya hablado anterior mente.

Vista 40X:

Esta es una imagen de nuestra muestra donde podemos observar a las 7 estas señaladas con rojo se 10 fibras musculares, 

 

Muestra del equipo 3:

Esta muestra me llamo mucho la atención por observo un huevecillo este señalado con una flecha azul

Muestra del equipo 2:

En esta muestra se puede observar detalladamente algunas fibras vegetales.

Muestra del equipo 4:

Aquí se puede observar una fibra de residuo vegetal,  este señalado con una flecha amarilla.

 







Muestra del equipo 1:

Aquí esta muy caro se muestra células vegetales.

Conclusión:

Nosotros para hacer esta práctica hay que saber diferenciar entre:

            - Cualitativos: Son aquellos que solo nos informan si hay o no formas
                               parasitarias en el producto estudiado.

       - Cuantitativos:   Nos dan a conocer numéricamente cuantas formas
                                   parasitarias están presentes, las cuales se reportan
                                   por   gramo o mililitro   de heces, según la técnica
                                   que se utilice.

Esta técnica en general es precisa para hacer conteo de huevos.

Comentario:

En lo personal esta practica me pareció un poco fácil, ya que no tenemos que centrifugar ni nada de eso, me hubiese gustado haber encontrado huevecillos de algún parásito y así proceder con esta técnica como se nos dice y hacer el calculo correctamente, así tener el resultado fijo y claro.

Fuentes de información:

http://es.scribd.com/doc/51575922/1/METODO-DE-STOLL

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

 

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

Objetivo:

Realizar método de concentración por flotación simple.

Introducción:

En 1921 Willis, basándose en métodos de flotación simple anteriores describió el método que lleva su nombre, el cual dada su sencillez, se puede utilizar en trabajos de campo, ya que para realizarlo únicamente se requiere microscopio y laminillas. Este método se basa en un principio de flotación simple, utilizando una solución de cloruro de sodio de una densidad entre 1.200 y 1.250, en la cual los quistes, huevos y larvas flotan perfectamente.

Las técnicas de flotación permiten la separación de quistes de protozoos y huevos de ciertos helmintos del exceso de residuos mediante el uso de soluciones con elevada gravedad específica. Los elementos parasitarios son recuperados de la capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Con estas técnicas los preparados son más limpios que los obtenidos por sedimentación. Sin embargo, algunos huevos (como los opérculados, o los densos como los estériles de Ascaris lumbricoides) no se concentran bien en las flotaciones; en estos casos se recomienda el uso de técnicas de sedimentación. De todas maneras, en las flotaciones se observa también el fondo del tubo para asegurar la recuperación de todos los posibles organismos. Con el fin de maximizar la eficacia en la detección de parásitos intestinales se recomienda el uso de ambos métodos diagnósticos de manera conjunta.

Frecuencia de recuperación de helmintos y protozoos mediante dos técnicas de flotación.

<!--[if !vml]--><!--[endif]-->

Fundamento:

Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio (NaCl).

Los huevos y los quistes de peso específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del líquido.

Material:
·         vaso de precipitados
·         embudo
·         gasa
·         tubo de ensaye
·         Portaobjetos
·         Cubreobjetos
·        abate lenguas

Reactivos:

·         Solución saturada de cloruro de sodio (NaCl)

·         Solución de yodo-lugol

Reactivos biológicos del ser humano:

·        Muestra de heces fecales

Método:

Tomar aproximadamente 1gr. De heces con un abate lenguas.

Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.

En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa, llenando completamente el tubo.

Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de tal manera que el liquido haga contacto con el cubreobjetos.

 

5)    Esperar de 5 a 10 minutos.

6)    Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos que esta en contacto con la mezcla de heces y cloruro de sodio saturado.

Colocar una gota de yodo-lugol sobre un portaobjeto, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.

8)   Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40X, buscando quistes o huevecillos.   

  

Resultados:

               HECES FECALES 40X:

Encontramos un quiste de Entamoeba histolytica y fibras musculares. La Entamoeba histolytica es un parasito común en el intestino grueso de los humanos. Muchos casos son asintomáticos excepto en humanos que viven bajo estrés. Esta se transmite a través de las excretas de personas infectadas, a través del agua o alimentos contaminados estos se presentan en quistes y después se pueden presentar en trofozoítos.

Conclusión:

Cuando se presentan quistes estos presentan 4 núcleos en los quistes maduros puede haber menos de 4 en los inmaduros, pero nunca más. El citoplasma de los quistes pueden tener barras cromatoideas, con extremos redondeados, lisos. Su tamaño de los quistes es de 10ע-20ע estos son esféricos.

Comentario:

Mi punto de vista de esta práctica es que esta es fácil y sencilla y un poco rápida pero comparando con la de Ritchie esta es más eficaz que la de willis ya que recupera más helmintos. El método de willis lo debemos hacer con mucho cuidado ya que tenemos que hacer los movimientos rápidos ya que cuando el cubreobjetos lo ponemos al portaobjetos este movimiento debe ser rápido para que no se nos caigan los quistes o los huevos y así demos resultados verdaderos.

Fuentes de información:

·         E:\Parasitología latinoamericana - Estudio comparativo de recuperación de formas parasitarias por tres diferentes métodos de enriquecimiento coproparasitológico.htm

·         E:\MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN WILLIS « Parasitología General.mht

·         Diagnóstico microbiológico – koneman/allen/Dowell/Janda/Sommers/Winn.

·         Métodos de laboratorio M.J.lynch.